### 人卵巢癌细胞A2780培养指南

#### 一、细胞培养条件

细胞名称：人卵巢癌细胞A2780
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S
传代方法：首次建议以1:2比例传代，传代周期建议为2天更换培养液。
备注：收集培养基时请使用无菌离心管，留作对比培养参考。如果对比培养效果不佳，建议直接购买人生就是博-尊龙凯时的完全培养基。

#### 二、细胞收到后的处理

细胞收到后，待培养至良好状态后，应将其灌满完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。使用75%酒精消毒整个细胞瓶，放入超净台内进行无菌操作。之后，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态。请通过显微镜观察细胞生长情况，建议对不同倍数（40x, 100x, 200x）拍照保存，前三天的照片作为重要售后依据。若未提供照片则视为细胞状态良好。注意在将密封培养瓶放入培养箱时，建议松开瓶盖，并在传代时使用一瓶原瓶的完全培养基，另一瓶则使用自行制备的完全培养基，以便进行对比培养。

#### 三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：
若细胞密度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养液并放入37℃、5% CO2的孵箱培养；如细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml于培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，当观察到细胞开始脱落时，迅速取回，在轻敲几下后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 吹打细胞使其完全脱落后，将悬液转移至15ml离心管，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），新加入完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存：
1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml，观察细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻吹使细胞脱离。转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 冻存细胞直接放入-80℃冰箱；如需转入液氮罐，则需至少在-80℃存放24小时后再转入。

c. 细胞复苏：
1. 从液氮中快速取出冻存管（务必佩戴防护面具），置于37℃水浴中解冻。外壁用75%酒精消毒。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中较为敏感，容易脱落。在此情况下，请将所有培养液收集至离心管，进行1000 RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。重悬后，轻轻吹打再进行消化，最后按上述步骤分瓶传代，补充新的完全培养基，放入37℃、5% CO2培养箱中。

#### 五、售后条款

1）细胞在出现问题时可重发的情况包括：
- 在运输过程中出现细胞丢失、瓶身破损等问题。
- 收到后的细胞在48小时内如出现污染，经核实后可重发。
- 常温发货的细胞，如静置24小时后出现活性问题，需提供真实清晰的照片，可重发。
- 其他相关问题的处理需结合收到的照片及详细操作步骤，技术人员会根据具体情况判断。

2）细胞出现问题但不予重发的情况包括：
- 客户造成的污染、错误操作等。

在细胞培养过程中，请务必遵循上述指导，以确保细胞的健康和活性。对于任何需求，欢迎联系我们人生就是博-尊龙凯时，我们竭诚为您服务，确保您的实验成功。